多功能酶標(biāo)儀即酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀。是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的儀器又稱微孔板檢測(cè)器。可簡(jiǎn)單地分為半自動(dòng)和全自動(dòng)兩大類,但其工作原理基本上都是一致的,其核心都是一個(gè)比色計(jì),即用比色法來進(jìn)行分析。測(cè)定一般要求測(cè)試液的終體積在250μL以下,用一般光電比色計(jì)無法完成測(cè)試,因此對(duì)酶標(biāo)儀中的光電比色計(jì)有特殊要求。
酶標(biāo)儀的工作原理與光度比色計(jì)類似,主要分為半自動(dòng)和全自動(dòng)兩類;半自動(dòng)在測(cè)量時(shí)需要手動(dòng)調(diào)節(jié)孔版,而全自動(dòng)則不需要,儀器可自動(dòng)成排檢測(cè)。主要用于ELISA測(cè)定,由于ELISA測(cè)量對(duì)于樣品體積有要求,普通的光電比色計(jì)無法完成測(cè)試。
1、將標(biāo)準(zhǔn)品和樣品對(duì)應(yīng)的微孔編號(hào),每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品做雙孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的位置。
2、在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入50µl各標(biāo)準(zhǔn)品溶液,酶標(biāo)儀在各樣品孔中加入50µl樣品溶液。
3、在所有孔中加入50µl的抗體工作液,用蓋板膜封板,輕輕振蕩混勻,25℃環(huán)境中避光反應(yīng)30分鐘。
4、小心揭開蓋板膜,甩干孔中液體,用稀釋好的洗滌液(250μl/孔)充分洗滌微孔板3次,在吸水紙上拍干(拍干后未清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破)。
5、酶標(biāo)儀在所有孔中加入100µl的酶標(biāo)二抗,酶標(biāo)儀用蓋板膜封板,輕輕振蕩混勻,25℃環(huán)境中避光反應(yīng)30分鐘。取出酶標(biāo)板,按步驟4洗板5次。
6、洗滌程序完成后,立即用微量移液器在每個(gè)微孔中先加入50µl底物液A,再加50µl底物液B,輕微晃動(dòng)反應(yīng)板使之*混勻,25℃環(huán)境避光顯色15分鐘(在顏色淺的情況下可適當(dāng)延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間,但總顯色時(shí)間不要超過30分鐘)。
7、每孔中加入50µl終止液,輕輕晃動(dòng)使之*混勻,在450nm(建議使用雙波長(zhǎng)450/630nm)下檢測(cè)吸光度,結(jié)果在5分鐘內(nèi)讀取。